Grao en Farmacia
http://hdl.handle.net/10347/11484
2024-03-29T02:13:31ZNeurotoxicidade do Metilmercurio
http://hdl.handle.net/10347/31821
Neurotoxicidade do Metilmercurio
Caamaño Lourido, Eloi
O mercurio (Hg) é un metal tóxico empregado historicamente para diferentes propósitos como
a minería de metais preciosos, constituíndo un contaminante ambiental a nivel mundial. As
súas características fisicoquímicas permítenlle experimentar unha serie de procesos
bioxeoquímicos a partir dos cales, mediante a participación da microbiota acuática,
prodúcense diferentes especies derivadas, entre as cales destaca o metilmercurio (MeHg+
).
Trátase dun potente neurotóxico que pode supoñer un risco para aquela poboación que se
vexa exposta a el mediante o consumo de especies marítimas contaminadas. O metilmercurio
pode exercer a súa toxicidade en diferentes partes do organismo, sen embargo, o sistema
nervioso central é particularmente sensible ós seus efectos. A exposición neurolóxica a este
tóxico conleva unha ampla colección de alteracións moleculares e celulares entre as que se
inclúen estrés oxidativo, disfunción mitocondrial, dishomeostase de glutamato e Ca2+
,
alteracións epixenéticas ou apoptose celular. Neste traballo de fin de grao realizarase unha
análise dos aspectos relativos ó ciclo bioxeoquímico deste elemento, ademais do estudo dos
efectos a nivel celular e molecular do MeHg+
, indicando os tipos celulares e os mecanismos
polos que se ven afectados; Mercury (Hg) is a toxic heavy-metal element widely known for its different historical
applications such as the mining of precious metals, which also constitutes an environmental
pollutant worldwide. Its physicochemical properties allow it to experience a series of
biogeochemical processes from which, through the participation of aquatic microbiota, different
derived species are produced, among which methylmercury (MeHg+
) stands out. It is a potent
neurotoxicant that can pose a risk to those who expose themselves to it through the
consumption of contaminated marine species. Methylmercury can exert its toxicity in distinct
parts of the human being; however, the central nervous system is particularly susceptible to
its effects. A wide collection of molecular and cellular alterations such as oxidative stress,
mitochondrial dysfunction, glutamate and Ca2+ dishomeostase, epigenetic alterations or cell
apoptosis are included among the main effects after neurological exposure to methylmercury.
In this thesis, both an analysis of the aspects related to the biogeochemical cycle of Hg and a
study of the cellular and molecular effects of MeHg+
, indicating affected cell types and
prevalent cellular toxic mechanisms will be made
2023-01-01T00:00:00ZDesarrollo de un modelo celular in vitro de esquizofrenia para ensayos de cribado de alto rendimiento
http://hdl.handle.net/10347/31818
Desarrollo de un modelo celular in vitro de esquizofrenia para ensayos de cribado de alto rendimiento
Carrete Bueno, Jesús
La esquizofrenia es en la actualidad una de las enfermedades mentales que mayor grado de
incapacidad genera. Se caracteriza por la presencia de tres tipos de síntomas: positivos,
negativos y cognitivos. Hoy en día no existe cura para este trastorno, y los tratamientos
farmacológicos se orientan a la mejora de la sintomatología de los pacientes. A pesar de que
los tratamientos farmacológicos actuales mejoran los tratamientos clásicos, siguen sin
constituir una terapia óptima para el tratamiento de todos los síntomas de esta enfermedad,
en especial los síntomas cognitivos. Es por esto que es imprescindible desarrollar nuevos
tratamientos que permitan mejorar la calidad de vida de los pacientes. Para poder evaluar
nuevas moléculas con potencial terapéutico, los modelos de estudio se basan en ensayos con
varias líneas celulares, sin embargo, no constituyen modelos de estudio idóneos por no
reflejar un fenotipo similar al de la patología. Durante este TFG se ha trabajado en la
diferenciación de la línea celular SH-SY5Y con el fin de desarrollar un modelo celular in vitro
de esquizofrenia para ensayos de cribado de alto rendimiento; Schizophrenia is currently one of the most disabling mental illnesses. It is characterized by the
presence of three types of symptoms: positive, negative and cognitive. Nowadays there is no
cure for this disorder, and pharmacological treatments are oriented to the improvement of
patients' symptoms. Although current pharmacological treatments improve the classical
treatments, they still do not constitute an optimal therapy for the treatment of all the
symptoms of this disease, especially the cognitive symptoms. This is why it is essential to
develop new treatments to improve the quality of life of patients. In order to evaluate new
molecules with therapeutic potential, study models are based on assays with several cell lines,
however, they are not suitable study models because they do not reflect a phenotype similar
to that of the pathology. During this TFG we have worked on the differentiation of the SHSY5Y cell line in order to develop an in vitro cell model of schizophrenia for high-throughput
screening assays
2023-01-01T00:00:00ZVisión comparada del binomio del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y la tuberculosis
http://hdl.handle.net/10347/30355
Visión comparada del binomio del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y la tuberculosis
Dix Montoya, Carlota Ana
La TB y el VIH/SIDA son dos de las enfermedades infecciosas que más muertes han provocado
a lo largo de la historia de la humanidad. Al combinarse constituyen un binomio perfecto de
morbilidad y mortalidad, ya que una acelera la progresión de la otra.
En las últimas décadas se han desarrollado distintos métodos diagnósticos y fármacos para
detectar y tratar estas enfermedades. La terapia de la TB está formada por numerosos
fármacos, sin embargo, en los últimos años las micobacterias han adquirido resistencias al
tratamiento clásico, lo que ha obligado al desarrollo de nuevos fármacos para poder continuar
tratando a los pacientes. En el caso del VIH, el desarrollo del ART ha supuesto un gran avance
para hacer frente a la infección. Los pacientes que siguen esta terapia pueden llevar una vida
prácticamente normal.
Para tratar la coinfección se utilizan los mismos fármacos combinados que para cada infección
por separado, teniendo en cuenta algunos factores al empezar este tratamiento.
En los últimos años los casos de TB han aumentado, especialmente aquellos vinculados al VIH
en países en vías de desarrollo. Por ello, es muy importante concienciar a la población sobre
el problema e incentivar la prevención y el acceso al tratamiento para todas las personas que
lo necesiten; TB and HIV/AIDS are two of the deadliest infectious diseases in human history. Together, they
form a perfect combination of mortality and morbidity, as one accelerates the progression of
the other.
In the last decades, different diagnostic methods and drugs have been developed to detect
and treat these diseases. Therapy of TB consists of many drugs, however, in the last years the
mycobacteria have acquired resistance against the classic treatment, which have forced the
development of new drugs to be capable to continue treating patients. For HIV, the increasing
of ART was very significant to treat the infection. Patients who follow the ART can lead almost
normal lives.
The same combined drugs are used to treat the coinfection. We must focus on some factors
when starting this treatment.
In recent years, cases of TB have increased, especially those linked to HIV in developing
countries. It’s therefore very important to raise public awareness of the problem and
encourage prevention and access to treatment for all those who need it
2022-01-01T00:00:00ZDesarrollo de un ensayo in vitro para la identificación de compuestos inhibidores de la actividad reductasa de la hAASS, diana terapéutica de la epilepsia dependiente de piridoxina
http://hdl.handle.net/10347/30354
Desarrollo de un ensayo in vitro para la identificación de compuestos inhibidores de la actividad reductasa de la hAASS, diana terapéutica de la epilepsia dependiente de piridoxina
Cabanas Trevin, Lucía
La epilepsia dependiente de piridoxina (EDP) es una enfermedad rara producida por la mutación en el
gen ALDH7A1 que codifica para la antiquitina (ATQ), una enzima que participa en el metabolismo
degradativo de la L-lisina. El déficit de antiquitina produce una interrupción del catabolismo de dicho
aminoácido, que se traduce en la acumulación de metabolitos tóxicos (responsables de la afectación
cognitiva) y en el desequilibrio entre neurotransmisores inhibidores y excitadores (responsable de las
crisis convulsivas). Las crisis convulsivas de esta enfermedad se consiguen tratar con piridoxina a dosis
farmacológicas, sin embargo, hasta un 75% de los pacientes presentan problemas relacionados con el
neurodesarrollo.
Dado que los compuestos neurotóxicos acumulados son los productos formados por la alfa
aminoadipato semialdehído sintetasa humana (hAASS), se ha desarrollado un ensayo de actividad
reductasa in vitro con la finalidad de una posterior identificación de compuestos inhibidores. Para ello,
a partir de un plásmido comercial clonado con el cDNA que codifica para la hAASS (previamente
amplificado y purificado) se llevó a cabo la expresión de la proteína recombinante hAASS-myc-His6 en
células HEK293T mediante un proceso de transfección química y se purificó en su forma activa
mediante cromatografía de afinidad a Ni2+ y diálisis. Finalmente, se validó la actividad reductasa de la
hAASS-myc-His6 mediante el desarrollo y optimización de un ensayo de absorbancia (monitorización
del consumo de Nicotinamida Adenina Dinucleótido Fosfato o NADPH), al que se acopló un ensayo de
detección luminiscente para evitar interferencias de compuestos coloreados y aumentar la
sensibilidad; Pyridoxine dependent epilepsy (PDE) is a rare disease caused by the mutation in ALDH7A1 gene which
encodes for antiquitin (ATQ), an enzyme that participates in L-lysine degradative metabolism.
Antiquitin deficiency produces catabolism interruption of aforementioned aminoacid, which leads to
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the accumulation of toxic metabolites (responsibles for cognitive affectation) and the imbalance
between inhibitory and excitatory neurotransmitters (responsible for convulsive crisis). The convulsive
crisis of this disease can be trated with pharmacologic doses of pyridoxine nevertheless, up to 75% of
patients show problems related with neurodevelopment.
Due to neurotoxic compounds accumulated are the products formed by human alpha aminoadipic
semialdehyde synthase (hAASS), a reductase activity in vitro assay has been developed with the
purpose of the later identification of inhibitor compounds. For this, a commercial plasmid was cloned
with cDNA which codifies for hAASS (previously amplified and purified), the recombinant protein
hAASS-myc-His6 was expressed in HEK293T cells by a chemical transfection and purified in its active
form through affinity chromatography to Ni2+ and dialysis. Finally, hAASS-myc-His6 reductase activity
was validated by development and optimization of an absorbance assay (monitorization of
Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate or NADPH consumption), coupling a luminescent assay
detection to avoid coloured compounds interferences and to increase sensitivity
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